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血球计数板介绍用优质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有***支持柱,将特制的用盖玻片覆盖其上,形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格,分为9个大方格,每个大格面积为1.0mm。容积为0.1mm3(ul),其中,大方格用双线分成25个中方格,位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域,用单线划分为16个小方格。
四角的4个大方格是白细胞计数区域,用单线划分为16个中方格。根椐***际标准局(NBS)规定,大方格每边长度允许误差为±1%。
使用方法:
1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面***般稀释100倍),以每小格的菌数可数为度。
2.取洁净的血球计数板***块,在计数区上盖上***块盖玻片。
3.将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入***小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上(不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高),然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。
4.静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。由于细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。
5.25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数1个大方格的菌数(即80个小格)。为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,在计数时,对沉降在格线上的细胞的统计应有统***的规定。如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格,本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。
6.对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小***半时,即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次(每次数值不应相差过大,否则应重新操作),按公式计算出每mL(g)菌悬液所含细胞数量。
7.测数完毕,取下盖玻片,用水将血球计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。